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馬梨形蟲(chóng)?。≒iroplasmosis)PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:馬梨形蟲(chóng)?。≒iroplasmosis)PCR試劑盒適用于馬屬動(dòng)物(馬、驢、騾和斑馬)的馬梨形蟲(chóng)病輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

  • 更新時(shí)間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:254

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號(hào)YLK10390P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
保存條件低溫運(yùn)輸,-20℃保存有效期12個(gè)月
試劑盒說(shuō)明不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用

馬梨形蟲(chóng)?。≒iroplasmosis)PCR試劑盒


產(chǎn)品名稱(chēng):馬梨形蟲(chóng)?。≒iroplasmosis)PCR試劑盒

英文名稱(chēng):Diagnostic Kit for Piroplasmosis DNA(Real-Time PCR Method)

馬梨形蟲(chóng)病是由馬泰勒蟲(chóng)和駑巴貝斯蟲(chóng)寄生于馬屬動(dòng)物(馬、驢、騾和斑馬)的紅細(xì)胞內(nèi)所引起的蜱傳性血液原蟲(chóng)病。本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),對(duì)馬泰勒蟲(chóng) 18S 基因和駑巴貝斯蟲(chóng) BC48 基因分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物和一條特異性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)馬梨形蟲(chóng)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。


【試劑組成】

包裝規(guī)格

50T/

Piroplasmosis 反應(yīng)液

500μL×2

酶液

50μL×1

Piroplasmosis 陽(yáng)性質(zhì)控品

50μL ×1

陰性質(zhì)控品

250μL ×1


【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,有效期 9 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺動(dòng)物的淋巴結(jié)或脾臟 2g;待檢活動(dòng)物,抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸, 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。


【使用方法】

1.  樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1  樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱(chēng)取樣品約 1g,手術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;咽/拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2  核酸提取

推薦采用本公司生產(chǎn)的核酸提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.  試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿(mǎn)

10 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

Piroplasmosis 反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為 N

20μL

1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。

3.  加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。

4.  PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1  將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2  設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye) FAM、VIC, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿選擇 ROX

參比熒光。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

 

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

95

10min

2

40 cycles

94

15sec

55

30sec

 



5.  結(jié)果分析判定

5.1  結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線(xiàn)出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2  結(jié)果判斷

FAM 通道為馬泰勒蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果,VIC 通道為駑巴貝斯蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果。陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35,且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線(xiàn);

可疑:檢測(cè)通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線(xiàn)有明顯的增長(zhǎng)曲線(xiàn), 判定為陽(yáng)性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

6.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

7.  檢測(cè)方法的局限性

1. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

3. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

4. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6. 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

【注意事項(xiàng)】

1. 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專(zhuān)用工作服;

6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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