中文名稱：花生源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Peanut-Derived Material Probe qPCR Kit

產品及特點

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有花生源性成分?，F代食品加工 工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性，因此傳統(tǒng)的 感官鑒別技術已經無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏 性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監(jiān)管和安全提供 重要的保障。本公司開發(fā)了簡單快捷的花生源性成分探針法熒光定量 PCR 檢測 試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DN/A 模板。

2. 引物和探針經過優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據花生源性成分 DN/A 高度保守區(qū)設計，不會跟其他物 種的 DN/A 發(fā)生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5 個數量級。

6. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。

7. 本產品只能用于科研

規(guī)格及成分

2×Probe qPCR MagicMix：500 μL（紅蓋）

熒光 PCR 專用模板稀釋液：1 mL（綠蓋）

超純水：1 mL（白蓋）

花生源性成分探針法 qPCR 引物-探針混合液：150 μL（棕色管）

花生源性成分探針法 qPCR 陽性對 照(1×10E7 拷貝/μL)：50 μL（黃蓋）

使用手冊：1 份

運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。

自備試劑樣品 DN/A。

使用方法一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。 由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本 產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DN/A 片段作為陽性對照。 1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭， 下同。 3. 在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DN/A 的制備

7. 如果有 N 個樣品待提取，最好設置 N+2 個提取，多出的是 PC（樣品制備陽 性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）?？梢匀￡栃詫φ盏?1000 倍稀釋液 10μL 再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作 為 PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DN/A，本試劑盒跟市場上大多數 DN/A 提取試劑盒兼 容。

三、Probe qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用 水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設 置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后最后加）

11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 PCR：

四、數據處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值 為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品核 酸濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該 小于或等于 37。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小 于或等于 37 則為陽性。如果在 37-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。

花生源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒僅供科研。

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