尿酸（Uric Acid, UA）含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

注　意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

UA 是鳥類和爬行類動物的主要代謝產(chǎn)物，正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素，含少量尿酸。此外，UA 還是重要的抗氧化劑，能清除超氧化物，羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量不平衡會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如，血中 UA 升高會引起痛風(fēng)、腎功能損害和動脈硬化，相反 UA 降低會引起惡性貧血，在臨床診斷上具有重要的意義。

測定原理：

尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素，CO2 及 H2O2，H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ，F(xiàn)e3+進一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物，在 505nm 下有特征吸收峰，測定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值，可計算尿酸的含量。

自備實驗用品及儀器：

恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

緩沖液：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：

A：用于標準管和測定管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 13mL 緩沖液溶解。

B：用于空白管，粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 7 mL 緩沖液溶解。

試劑二：粉劑 1 管，4℃避光保存，使用前加 2mL 蒸餾水溶解，60℃加熱溶解。

樣品的制備：

1.        動植物組織：建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水，進行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2.        血清，培養(yǎng)液：直接檢測。

測定操作表：

1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 505nm。

2、 操作表

混勻，37℃水浴 30min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，測定 505nm 處各管吸光值，標準管和空白管只需做一管。

UV 含量計算公式：

1.    組織：

（1）按樣本重量計算

尿酸含量（μmol/g 鮮重）=C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷（W÷V樣總）=0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

尿酸含量（μmol/mg prot）=C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ Cpr =0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷Cpr

尿酸（μmol/L）= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）×103 =500×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

C   標：標準品濃度 0.5μmol/mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：

樣本蛋白濃度，mg/mL；103  ：1μmol/ L=103μmol/ mL

注意事項：

1.    血清樣本請在 24 小時內(nèi)測定，或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時。

2.    吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本，并在計算公式中算入稀釋倍數(shù)。

3.    z低檢出限為 10μmol/L。