血清鐵濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                 微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

血清鐵是指血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白所結(jié)合的鐵，該指標(biāo)常用于鑒別缺鐵性與非缺鐵性貧血。

測(cè)定原理：

亞硫酸鈉還原血清Fe³⁺生成成Fe²⁺，Fe²⁺進(jìn)一步與2, 2’- 聯(lián)吡啶顯色，在520nm處有吸收峰，測(cè)定該波長(zhǎng)光吸收值即可計(jì)算血清鐵含量。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、冰醋酸、氯仿和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入15 mL蒸餾水充分溶解。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，加入469μL冰醋酸，加入15 mL蒸餾水充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體1mL×1支（EP管），100 μmol/L Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到520 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液解凍：提前取出標(biāo)準(zhǔn)液，置于室溫下充分解凍后混勻。

3. 空白管：取EP管，依次加入125 μL蒸餾水，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來(lái)水冷卻。加入62 μL氯仿（自備），充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入125 μL標(biāo)準(zhǔn)液，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來(lái)水冷卻。加入62 μL氯仿，充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取EP管，依次加入125 μL血清，125 μL試劑一，125 μL試劑二，混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來(lái)水冷卻。加入62 μL氯仿，充分震蕩混勻；室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層液210 μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于520 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血清鐵濃度計(jì)算公式：

血清鐵含量(μmol /dL)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總

=10 × (A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：100 μmol/L Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液；V總：標(biāo)準(zhǔn)液總體積1mL；1 dL=0.1 L。

注意事項(xiàng)：

1、血清鐵含量少，所用器皿（EP管）需要注意，避免被鐵污染。

2、試劑一和試劑二溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用，新配制的試劑只能當(dāng)天使用。

3. Z低檢出限為1μmol/L。