血磷濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                   微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷，以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以mg/dL表示時(shí)，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴(lài)于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。

測(cè)定原理：

去除血清中有機(jī)磷后，無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色，在620nm有光吸收；通過(guò)測(cè)定620 nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體1.6mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前配制，依次加入11mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1支，1 mmol/L無(wú)機(jī)磷，4℃保存。

血磷濃度測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理：吸取50 μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測(cè)。

4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL蒸餾水，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測(cè)定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL上清液，50μL試劑一，100μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血磷濃度計(jì)算：

血磷含量（mmol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL血清=20；V樣總：100 mL=0.1 L。

注意事項(xiàng)：

1、   試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；

2、   測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無(wú)機(jī)磷含量增高。

3、   Z低檢出限為10μmol/L。