土壤木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（Soil lignin peroxidase，S-Lip）試劑盒說(shuō)明書

 微量法100T/48S

注    意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶，屬于木質(zhì)素降解酶系，在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應(yīng)用潛力。

測(cè)定原理：

木質(zhì)素過(guò)氧化物酶氧化藜蘆醇生成藜蘆醛，在310nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。

試劑組成和配制：

試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。                    

樣品處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

測(cè)定操作：

酶活計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-LiP活性（nmol/d /g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 344×△A÷W

ε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.4mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h

b.       用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-LiP活性（nmol/d /g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 688×△A÷W

ε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.4mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h